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使用FLUOREYE測量貼壁哺乳動物細胞的融合度

更新時間:2024-12-16瀏覽:583次

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簡介

FLUOREYE是一種熒光檢測解決方案,專為與現(xiàn)有系統(tǒng)無縫集成而設計,無需額外空間或設備。它有兩個激發(fā)波長和兩個檢測波長,可實現(xiàn)集成的熒光信號定量和后續(xù)均一化,無需用戶干預。在這里,我們展示FLUOREYE可用于測量被SYBR™ Safe(一種高靈敏度的熒光核酸染料)染色的活細胞熒光強度,從而確定96孔板中培養(yǎng)的細胞的融合度。因此,F(xiàn)LUOREYE將其用途擴展到細胞生物學領域。在Hamilton自動化液體處理設備上使用FLUOREYE進行自動細胞融合度測量,可以在96孔板中追蹤培養(yǎng)細胞的生長,而不需要顯微鏡、精密的成像設備或復雜的分析軟件。按照易操作的自動化工作流程,把細胞用SYBR™ Safe核酸染料(Invitrogen S33102)進行染色,然后將培養(yǎng)板放在工作站臺面上進行分析。這種方法減少了成本和用戶干預,同時提高了可重復性和通量。

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優(yōu)點

1. 在細胞檢測或細胞培養(yǎng)的自動化解決方案中,它是一種測量細胞融合度的實用、經(jīng)濟高效的工具。

2. 無需動手就可以自動選擇合適的時間點開始細胞培養(yǎng)實驗、傳代或進行細胞增殖實驗。

3. 高度可重復、標準化和準確的細胞融合度測定方法。

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使用Hamilton FLUOREYE自動測量細胞融合度是傳統(tǒng)顯微鏡成像的一種高性價比的替代方法,也是哺乳動物細胞生長追蹤的一種無人值守、易于整合的臺面式解決方案。


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細胞培養(yǎng)

在標準培養(yǎng)條件下,在添加了10%FBS(Gibco,A5256801)的高糖DMEM(Gibco,L0101-500)培養(yǎng)基中培養(yǎng)HEK293細胞。實驗前一天,對細胞進行計數(shù),并將其接種在黑色96孔板(Greiner CELLSTAR 655090)中。SYBR™ Safe染色和FLUOREYE測量在Hamilton Microlab STAR平臺上進行。為避免移液過程中細胞脫落,每一步操作完成后,孔中都要留出最少50µL的液體。用生長培養(yǎng)基將50µL SYBR Safe染料稀釋到500倍,然后每孔加入50µL染色液,最終稀釋到1000倍。

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用戶將細胞放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)30分鐘。培養(yǎng)結束后,將96孔板重新放到STAR平臺上。清洗細胞并替換為D-PBS培養(yǎng)基,以減少背景熒光。FLUOREYE測量在470nm波長下進行,LED功率為40。為了將測得的強度與細胞融合度進行定量比較,進行了手動顯微鏡檢查。


使用ImageJ軟件進行成像和融合度分析

用于融合度測量的亮場(BF)圖像由配備5倍物鏡和Axiocam 305成像裝置的蔡司Axiovert 5顯微鏡拍攝。對BF的tiff圖像格式進行裁剪以減少孔壁陰影,并使用ImageJ(1.54f 版)進行分析。測量像素面積,并以總覆蓋面積的百分比表示融合度。


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技術

FLUOREYE體積小巧,所需空間極小,可輕松集成到現(xiàn)有設備中,升級到熒光檢測解決方案,而無需昂貴的整合、外罩、運輸設備或為避免碰撞所進行的編程工作。FLUOREYE具有兩個激發(fā)波長和兩個檢測波長,可進行集成的熒光定量,隨后無需用戶干預的均一化使之可與目前市場上的許多試劑盒兼容。


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結果

用SYBR Safe核酸染料對HEK293細胞進行染色,然后用FLUOREYE在470nm波長下測量熒光強度。每孔強度與BF顯微鏡成像計算出的融合度相關。總體而言,實際細胞融合與FLUOREYE測量的熒光強度之間存在很強的相關性(R2=0.976)。細胞匯合度和熒光強度之間的線性相關在10% - 80%之間尤為準確,而在密度較高時,差異增大,這可能是由于細胞壓實和過度生長造成的。此外,F(xiàn)LUOREYE讀數(shù)顯示,細胞融合度在10 - 80%之間時,復孔之間的差異非常?。–V <8%)。

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